ELISA試劑盒檢測(cè)不成功的原因

更新時(shí)間：2017-06-26

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　　ELISA試劑盒即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，是一種常用的固相酶免疫測(cè)定方法。由于ELISA方法靈敏，特異性強(qiáng)不需要特殊設(shè)備，所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有的技術(shù)要求，在臨床檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常可見到一些錯(cuò)誤結(jié)果（即假陽性或假陰性）如標(biāo)本的影響為大家解讀ELISA檢測(cè)的影響因素。
溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測(cè)易產(chǎn)生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)（紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），在洗滌過程中往往難以洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧（O），從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，產(chǎn)生假陽性［2］。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。
標(biāo)本受細(xì)菌污染。因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果。
標(biāo)本保存不當(dāng)。在冰箱中保存過久的標(biāo)本，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過深、造成假陽性；為克服上述干擾，ELISA試劑盒測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集；如不能立即測(cè)定，5d內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測(cè)定，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩。
塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。好使用真空采血管；并使用非抗凝標(biāo)本，肝素抗凝血漿會(huì)增加OD值，EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。
標(biāo)本凝固不全。在工作中，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè)，常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后使其充分凝固后再分。

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