高質(zhì)量RNA提取條件之二

1.選擇好的RNA分離方法

現(xiàn)有眾多的RNA分離方法也許令人難以取舍。目前簡單也是安全的方法是柱式分離，如RNApure 因為操作簡單，時間短，純度高而受到大家的喜愛，RNApure不需要DNA酶消化DNA，節(jié)省了時間，避免RNA的降解，從而提高了產(chǎn)量；相對非柱式分離（如TRIZOL），去除蛋白及其他雜質(zhì)干凈，提高了純度，對于細胞、組織、一般植物均非常適合。植物RNA的提取比較難抉擇，植物RNA提取受酚、多糖、蛋白雜質(zhì)、次生代謝物含量的影響，一般用TRIZOL提取純度不高，而且很多植物用TRIZOL提取不出來。這時候可以選擇多糖多酚植物總RNA提取試劑盒（水仙、辣椒、胡蘿卜、玉米、百合、小麥、西紅柿、花菜、油菜等）和通用植物RNA提取試劑盒（適合絕大多數(shù)植物提取，包括：蘋果、葡萄、草莓、香蕉、龍眼、荔枝、草坪植物、松樹、杉樹、白樺、紫松果、彩葉草、一品紅、夾竹桃、垂葉榕、紫羅蘭、月季、天竺藍、牽牛花等）；非常值得一提的是血液（包括血清、血漿、腦脊液、其他液體）RNA的提取用TRIZOL和紅細胞裂解的方法效果都不好，紅細胞裂解液不含有RNA酶的抑制成分，這個過程RNA很容易降解，推薦使用TRIpure LS 或者血液總RNA提取試劑盒。

2.消除環(huán)境RNase的污染

為了得到完整的、高品質(zhì)RNA，在整個RNA制備過程中，當RNA離開強蛋白變性劑（如離液裂解液或酚）的保護時，避免引入新的RNase污染就非常關(guān)鍵。由于RNase存在，所以與純化的RNA接觸的每一樣東西都是無RNase污染的。的表面，包括移液器、工作臺、玻璃器皿和制膠設(shè)備，都用表面去污凈化溶液如RNase噴霧清除劑 來處理過，去除各種溶液或者反應(yīng)緩沖液中可能存在的RNase污染，可以用RNAsafe。一直使用無RNase的槍頭、試管和阿溶液，手套也應(yīng)經(jīng)常更換。

 3.提取好的RNA如何儲存

如果只是短期儲存，重懸的RNA應(yīng)放置于-20°C；如果是長期儲存的話，就應(yīng)該放置于-80°C。盡管重懸于水或緩沖液中的RNA也可以儲存在-80°C，但保存RNAlong中的RNA沉淀則更加穩(wěn)定，可以長期保存。我們推薦將RNA溶液分裝在幾支管中。這會避免反復(fù)凍融損傷RNA，并預(yù)防偶然的RNase污染。

4.使用正確的細胞或組織儲存條件

在樣品用液氮瞬間凍結(jié)之后，應(yīng)該儲存在-80°C，千萬不能解凍。即使是置于含有胍鹽的裂解液中作勻漿前的短暫解凍，也會導(dǎo)致RNA的降解和損失。瞬間凍結(jié)的組織應(yīng)該先在超低溫條件下先研磨成粉，然后置于裂解液中進行勻漿。