胎鼠海馬神經元的原代培養

一、背景

     海馬是大腦顳葉內側的一個解剖結構，因為形狀類似海馬稱為海馬體。海馬體的主要組成基本單位是神經元，海馬神經元的生理功能與人的記憶密切相關。一些疾病會使海馬神經元出現損傷，比如常見的阿爾茲海默病、單純皰疹病毒性腦炎、自身免疫性腦炎等等，如果這些疾病出現，就會導致記憶障礙，甚至癡呆的表現。

     神經細胞是近代神經學科中研究重點之一，神經細胞體外培養是指在體外模擬建立體內生長條件，使神經細胞或神經膠質細胞在其生存和生長并維持其形態和功能的方法。神經細胞體外培養技術已成為當今神經科學研究中的主要方法之一，與各種先進的技術結合在一起滲透到各個學科，但因神經細胞對體外培養條件要求條件較高難度大而又制約它的發展。

二、實驗步驟
1.無菌條件下，從懷孕18天的SD大鼠腹中取出胎鼠，放在預冷的無鈣、鎂的HBSS平衡鹽溶液中；                          
2.解剖顯微鏡下，看清海馬結構，剝去海馬上面的腦膜和血管；
3.加入0.05%胰酶-EDTA 消化液后放入 37℃孵箱內消化15分鐘，每5分鐘搖晃一次；
4.HBSS溶液洗三次；
5.在HBSS溶液中吹打10次左右，吹打過程中不能有氣泡；
6.所收集的上清過濾后，將細胞懸液于4℃1000rpm離心10min ，棄上清，管內加入種植液1重懸；
7.臺盼藍染色計數，以 3 x 104cells/孔種入包被的24孔板，37℃，5%CO2，95%飽和濕度的培養箱中培養。4-6小時后，全量換種植液2；
8.每周換液兩次，每次半量換液。