產(chǎn)物電泳實(shí)驗步驟

實(shí)驗材料和試劑
  （一）實(shí)驗樣品
  PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
  （二）試劑
  1．l DNA分子量標(biāo)準(zhǔn) （天根生物科技有限公司）
    2．1mg/ml溴化乙錠溶液 （碧云天）
3．電泳緩沖液（TAE）（碧云天）
    40 mmol/L   Tris-乙酸
    1 mol/L     EDTA
4．2.5% 瓊脂糖凝膠
（配制方法：稱取瓊脂糖2.5克，加入100ml TAE電泳緩沖液）
  （三）儀器
  微量移液器                天能電泳儀
  天能水平電泳槽            天能透射紫外觀察儀

實(shí)驗步驟
  1．選擇合適的水平式電泳槽，調(diào)節(jié)電泳槽平面至水平。檢查穩(wěn)壓電源與正負(fù)極的線路。
  2．選擇孔徑大小合適的點(diǎn)樣梳子，垂直架在電泳膠模的一端，使點(diǎn)樣梳子底部離電泳膠模底部的距離為1.0mm。
  3．制備2.5%瓊脂糖凝膠，100℃水浴加熱至瓊脂糖融化均勻。
  4．用吸管取少量瓊脂糖凝膠溶液將電泳膠模四周密封好，防止?jié)补喹傊悄z板時發(fā)生滲透。待瓊脂糖凝膠冷卻至60℃左右時，加入一滴溴化乙錠，搖勻，輕輕倒入電泳膠模中，瓊脂糖凝膠的厚度在3～5mm。倒膠時要避免產(chǎn)生氣泡，若有氣泡可用吸管小心吸去。
  5．瓊脂糖凝膠凝固后，在室溫放置20分鐘，小心拔掉點(diǎn)樣梳子和電泳膠模兩端的擋板，保持點(diǎn)樣孔的完好。
  6．將電泳膠模放入電泳槽中，加入電泳緩沖液，使電泳緩沖液面高出瓊脂糖凝膠表面1～2mm。如點(diǎn)樣孔內(nèi)有氣泡，用吸管小心吸出，以免影響加樣。
  7．將15ulDNA樣品與1/5體積的溴酚藍(lán)指示劑點(diǎn)樣緩沖液混合。上樣緩沖液不僅可以提高樣品的密度，使樣品均勻沉到樣品孔內(nèi)，還可以使樣品帶顏色，便于上樣和估計電泳時間和判斷電泳的位置。
  8．用微量移液器將樣品5ul小心加入加樣孔內(nèi)，記錄樣品點(diǎn)樣秩序。
  9．蓋上電泳槽，開啟電源開關(guān)，高電壓不超過5V/cm（100～150V恒壓電泳），使DNA從負(fù)極向正極移動。
  10． 電泳1小時,電泳完畢后關(guān)閉電源，戴一次性塑料手套取出凝膠，盡可能將的電泳緩沖液淋干，在254nm波長的透射紫外燈下觀察。