SILAC（定量蛋白質(zhì)組學(xué))的技術(shù)原理及特點(diǎn)

　　技術(shù)原理：
 

　　SILAC（定量蛋白質(zhì)組學(xué))的基本原理是分別用天然同位素(輕型)或穩(wěn)定同位素(重型)標(biāo)記的必需氨基酸取代細(xì)胞培養(yǎng)基中相應(yīng)氨基酸，細(xì)胞經(jīng)5-6個(gè)倍增周期后，穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸摻入到細(xì)胞新合成的蛋白質(zhì)中替代了原有氨基酸。不同標(biāo)記細(xì)胞的裂解蛋白按細(xì)胞數(shù)或蛋白量等比例混合，經(jīng)分離、純化后進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，根據(jù)一級(jí)質(zhì)譜圖中兩個(gè)同位素型肽段的面積比較進(jìn)行相對(duì)定量。屬于體內(nèi)代謝標(biāo)記法。
 

　　技術(shù)特點(diǎn)：
 

　　SILAC(定量蛋白質(zhì)組學(xué))是體內(nèi)標(biāo)記技術(shù)，穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸與天然氨基酸化學(xué)性質(zhì)基本相同，所標(biāo)記的細(xì)胞和未標(biāo)記細(xì)胞在生物學(xué)行為上沒有差異，標(biāo)記效率可高達(dá)100%。
 

　　SILAC（定量蛋白質(zhì)組學(xué))采用質(zhì)譜定量，定量結(jié)果準(zhǔn)確且批次變異小、重復(fù)性好。
 

　　體內(nèi)代謝標(biāo)記與SDS-PAGE或色譜分離技術(shù)相結(jié)合，兼容疏水性蛋白和偏堿性蛋白，不受蛋白性質(zhì)限制。
 

　　多個(gè)樣品混合后同時(shí)進(jìn)行分離、酶切和鑒定，后續(xù)實(shí)驗(yàn)對(duì)樣品的影響一致，減少了實(shí)驗(yàn)操作和儀器設(shè)備產(chǎn)生的影響。
 

　　由于該SILAC（定量蛋白質(zhì)組學(xué))屬于體內(nèi)標(biāo)記，標(biāo)記效果穩(wěn)定，其標(biāo)記效率不受裂解液的影響，不僅適合于進(jìn)行  全細(xì)胞蛋白的分析，還適合于膜蛋白的鑒定和定量。
 

　　SILAC(定量蛋白質(zhì)組學(xué))與化學(xué)標(biāo)記相比，SILAC(定量蛋白質(zhì)組學(xué))方法蛋白需要量明顯減少，通常每個(gè)樣品只需要幾十微克的蛋白量。
 

　　活體標(biāo)記，更接近樣品真實(shí)狀態(tài)。
 

　　SILAC（定量蛋白質(zhì)組學(xué))只適用于活體培養(yǎng)的細(xì)胞，對(duì)于生物醫(yī)學(xué)研究中常用的組織樣品，體液樣品等無法分析，對(duì)于動(dòng)物模型的標(biāo)記成本太大，無法實(shí)現(xiàn)。