技術(shù)原理：
SILAC（定量蛋白質(zhì)組學)的基本原理是分別用天然同位素(輕型)或穩(wěn)定同位素(重型)標記的必需氨基酸取代細胞培養(yǎng)基中相應氨基酸，細胞經(jīng)5-6個倍增周期后，穩(wěn)定同位素標記的氨基酸摻入到細胞新合成的蛋白質(zhì)中替代了原有氨基酸。不同標記細胞的裂解蛋白按細胞數(shù)或蛋白量等比例混合，經(jīng)分離、純化后進行質(zhì)譜鑒定，根據(jù)一級質(zhì)譜圖中兩個同位素型肽段的面積比較進行相對定量。屬于體內(nèi)代謝標記法。
技術(shù)特點：
SILAC(定量蛋白質(zhì)組學)是體內(nèi)標記技術(shù)，穩(wěn)定同位素標記的氨基酸與天然氨基酸化學性質(zhì)基本相同，所標記的細胞和未標記細胞在生物學行為上沒有差異，標記效率可高達100%。
SILAC（定量蛋白質(zhì)組學)采用質(zhì)譜定量，定量結(jié)果準確且批次變異小、重復性好。
體內(nèi)代謝標記與SDS-PAGE或色譜分離技術(shù)相結(jié)合，兼容疏水性蛋白和偏堿性蛋白，不受蛋白性質(zhì)限制。
多個樣品混合后同時進行分離、酶切和鑒定，后續(xù)實驗對樣品的影響一致，減少了實驗操作和儀器設備產(chǎn)生的影響。
由于該SILAC（定量蛋白質(zhì)組學)屬于體內(nèi)標記，標記效果穩(wěn)定，其標記效率不受裂解液的影響，不僅適合于進行 全細胞蛋白的分析，還適合于膜蛋白的鑒定和定量。
SILAC(定量蛋白質(zhì)組學)與化學標記相比，SILAC(定量蛋白質(zhì)組學)方法蛋白需要量明顯減少，通常每個樣品只需要幾十微克的蛋白量。
活體標記，更接近樣品真實狀態(tài)。
SILAC（定量蛋白質(zhì)組學)只適用于活體培養(yǎng)的細胞，對于生物醫(yī)學研究中常用的組織樣品，體液樣品等無法分析，對于動物模型的標記成本太大，無法實現(xiàn)。
更新時間：2023-03-07
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