上海染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)（ChIP）

上海染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)（ChIP）

      研究蛋白質(zhì)與DNA在染色質(zhì)環(huán)境下的相互作用是闡明真核生物基因表達(dá)機(jī)制的基本途徑。染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（chromatin immunoprecipitation assay, CHIP）是目前*研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法。它的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)－DNA復(fù)合物，并將其隨機(jī)切斷為長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DN***段，通過對(duì)目的片斷的純化與檢測(cè)，從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。CHIP不僅可以檢測(cè)體內(nèi)反式因子與DNA的動(dòng)態(tài)作用，還可以用來研究組蛋白的各種共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系。

上海染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)（ChIP）
實(shí)驗(yàn)操作流程：
1、樣品準(zhǔn)備與交聯(lián)
細(xì)胞收集后，用37%的formaldehyde處理細(xì)胞，交聯(lián)核酸與DNA結(jié)合蛋白；
2.超聲打斷染色質(zhì)
裂解細(xì)胞，用Bioruptor將染色質(zhì)超聲破碎成200－1000bp片斷；將片段分為兩份，一份用于免疫共沉淀，一份用于對(duì)照。
3、免疫共沉淀(IP) 

取B步驟所得一份片斷與ChIP特異抗體結(jié)合進(jìn)行免疫共沉淀，利用免疫磁珠法富集抗體復(fù)合物。
4、解交聯(lián)及純化DNA
將富集的DNA/蛋白復(fù)合物解交聯(lián)釋放DNA片段，并進(jìn)行純化（IP DNA）；B步驟所得用于對(duì)照（Input DNA）的片斷作不進(jìn)行IP實(shí)驗(yàn)，但也要解交聯(lián)并純化。
5、DNA段PCR擴(kuò)增
針對(duì)ChIP DNA, Input DNA及對(duì)照DNA的目的片段設(shè)計(jì)特異性引物并進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增。
 6、結(jié)果分析
%Input=2(Ct_Input-Ct_ChIP)×Fd×
Fold Enrichment = [%(ChIP/Input)] / [%( Negative control/Input)]

實(shí)驗(yàn):

1.基因組學(xué)：基因芯片、SNP檢測(cè)、DNA甲基化檢測(cè)、生物信息學(xué)分析

2.轉(zhuǎn)錄組學(xué)：microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq

3.蛋白質(zhì)組學(xué)：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM

4.基因檢測(cè)：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR

5.蛋白質(zhì)檢測(cè)：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA

6.病理檢測(cè)：HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選

7.代謝組學(xué)：GC-MS、LC-MS、NMR

8.細(xì)胞及動(dòng)物模型：原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動(dòng)物模型構(gòu)建

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