上海細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn).

                           上海細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn).
細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是一種簡(jiǎn)單易行的檢測(cè)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的方法，可以用來(lái)檢測(cè)貼壁生長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。

上海細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn).實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：

材料：6孔板（其他的也可以，但感覺(jué)6孔比較好，大小適中），MARKER筆，直尺，20微升槍頭（滅菌），無(wú)血清培養(yǎng)基，PBS

步驟：能滅菌的器械都要滅菌。MARKER筆，直尺在操作前紫外照射30MIN（超凈臺(tái)內(nèi)）

1.先用MARKER筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻地劃?rùn)M線，大約每隔0.5-1cm一道，橫穿過(guò)孔，每孔至少穿過(guò)5條線。

2. 在空中加入約5*105個(gè)細(xì)胞，具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同，掌握為過(guò)液能鋪滿

3. 第二天用槍頭比著直尺，盡量垂直于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不能傾斜

4. 用PBS洗細(xì)胞3次，去除劃下的細(xì)胞，加入無(wú)血清培養(yǎng)基。

5.放入37度5%CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)，按0. 6 .12 24小時(shí)取樣，拍照。

注意事項(xiàng)：

一般做劃痕實(shí)驗(yàn)，一般都在無(wú)血清或者低血清狀態(tài)下培養(yǎng)的，否則細(xì)胞增殖就不能忽略

按照6孔板背后劃線的垂直方向劃痕，可以形成若干交叉點(diǎn)，作為固定的監(jiān)測(cè)點(diǎn)，這就解決了前后觀察時(shí)位置不固定的問(wèn)題。