過敏性哮喘動(dòng)物模型

過敏性哮喘動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)服務(wù)介紹：

BALB/c小鼠于第0天和第14天分別腹腔注射OVA液和DBP溶液，第21~23天連續(xù)3天以O(shè)VA溶液霧化激發(fā)，每天于上午下午固定時(shí)間霧化2次，每次20min。霧化過程中觀察小鼠一般行為變化，后一次霧化結(jié)束后24小時(shí)，小鼠摘眼球取血，取支氣管肺泡灌洗液及肺組織。

一般行為學(xué)觀察  觀察小鼠在霧化過程中是否出現(xiàn)撓臉、毛發(fā)豎立、呼吸急促、煩躁不安、大小便失禁等現(xiàn)象。

血中Eos計(jì)數(shù)    后一次霧化激發(fā)結(jié)束24h后，小鼠摘眼球取血，獲得血液后立即取出20 μl與380μl 嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液混勻，利用細(xì)胞計(jì)數(shù)板于光學(xué) 顯微鏡下進(jìn)行Eos計(jì)數(shù)。

血清中IgE測定   將獲得的血液靜置2h后，離心，3500 rpm，15min，取血清，按IgE ELISA試劑盒說明書進(jìn)行測定，并通過樣本總蛋白含量進(jìn)行結(jié)果校正。

BALF細(xì)胞分類計(jì)數(shù)  將小鼠仰臥位固定，打開胸腔后，結(jié)扎右肺及左側(cè)肺上葉。分離并暴露氣管，用適宜針頭進(jìn)行插管，以預(yù)冷PBS反復(fù)灌洗肺組織（0.5 mL/次，共兩次），收集BALF，低溫離心( 3500 rpm，10min )，取上清，保存于-20℃待測。細(xì)胞沉淀用0.2 mL預(yù)冷PBS重懸，吹打均勻后取10 μl于細(xì)胞計(jì)數(shù)板上在光學(xué)顯微鏡下計(jì)細(xì)胞總數(shù)，剩余細(xì)胞懸液涂片，用快速瑞姬氏染液染色，顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。

BALF中IL-4、IL-5、IL-9、IL-13、IFN-γ的測定  將獲得的BALF上清根據(jù)相關(guān)細(xì)胞因子檢測試劑盒的說明書進(jìn)行各指標(biāo)定量檢測，測定結(jié)果經(jīng)總蛋白含量校正。

肺組織中IL-4和IFN-γ的測定  將右側(cè)肺組織用預(yù)冷的PBS研磨得15 % 組織勻漿，低溫離心，3500 rpm，15min，取上清按照 ELISA 測定試劑盒的操作步驟進(jìn)行IL-4和IFN-γ測定，并通過樣本總蛋白定量來進(jìn)行校正。

肺組織HE及PAS染色  剪取左肺上葉，置10%中性福爾馬林中固定，石蠟包埋，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE及PAS染色，鏡下觀察肺組織炎性細(xì)胞浸潤及黏性蛋白增生情況。

分子實(shí)驗(yàn)平臺(tái)：高效運(yùn)作了qRT-PCR、Western blot、雙向電泳技術(shù)、分子克隆與質(zhì)粒構(gòu)建、流式細(xì)胞儀檢測、免疫共沉淀、染色質(zhì)免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝膠電泳遷移實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附測定、外泌體抽提及鑒定等實(shí)驗(yàn)。

基因組學(xué)平臺(tái)：可以完成甲基化檢測、基因芯片分析、高通量測序等實(shí)驗(yàn)。

蛋白組學(xué)平臺(tái)：能實(shí)現(xiàn)LC-MS、ITRAQ、蛋白質(zhì)修飾分析等重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。

病理學(xué)平臺(tái)：涉及免疫熒光染色、免疫組織化學(xué)染色、HE染色、特殊染色等實(shí)驗(yàn)。

臨床前CRO服務(wù)：主要提供呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)性疾病的藥效學(xué)評(píng)價(jià)服務(wù)，包括靶點(diǎn)驗(yàn)證、體內(nèi)外模型的構(gòu)建、藥物篩選、藥物分析、藥效性評(píng)價(jià)、藥代

動(dòng)力學(xué)和藥理學(xué)研究以及院內(nèi)制劑研發(fā)等。

項(xiàng)目轉(zhuǎn)化服務(wù)：助力客戶進(jìn)行方案設(shè)計(jì)、聯(lián)合課題申報(bào)、藥物項(xiàng)目引進(jìn)和孵化，解決客戶對實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)、專業(yè)人和融資的需求。