原代細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)服務(wù)步驟

1. 取材與預(yù)處理

• 組織獲取：需無菌操作快速獲取新鮮組織（如肝臟、心肌等），避免機(jī)械損傷和干燥。例如，肝細(xì)胞分離需麻醉大鼠并進(jìn)行肝臟灌流；骨髓細(xì)胞需剪開小鼠下肢并沖洗骨髓

• 組織處理：剪碎組織至1-3 mm3小塊，便于后續(xù)消化。

1. 細(xì)胞分散

• 酶消化法（常用）：使用胰蛋白酶、膠原酶等消化細(xì)胞外基質(zhì)，釋放單個(gè)細(xì)胞。不同組織需調(diào)整酶濃度和作用時(shí)間（如小鼠腎臟需嚴(yán)格控制消化時(shí)間）。

• 機(jī)械法：通過剪切、研磨或擠壓分散組織，適用于堅(jiān)硬組織（如心肌）或纖維少的組織（如腦組織）。

• 懸浮離心法：低速離心分離血液或腹水中的細(xì)胞，利用密度差異分層收集。

2. 純化與培養(yǎng)

• 梯度離心/差異貼壁：去除雜質(zhì)細(xì)胞（如紅細(xì)胞）或利用貼壁速度差異純化目標(biāo)細(xì)胞（如心肌細(xì)胞）。

• 培養(yǎng)條件：使用含生長(zhǎng)因子（如EGF、bFGF）的培養(yǎng)基，并根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整血清濃度（如軟骨細(xì)胞需低濃度胎牛血清）。

原代細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)服務(wù)常用方法及適用性

注意事項(xiàng)

1. 無菌操作：全程在超凈臺(tái)中進(jìn)行，避免污染。

2. 酶活性控制：預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最佳酶濃度和作用時(shí)間，消化后需用含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。

3. 細(xì)胞活力檢測(cè)：使用臺(tái)盼藍(lán)染色法評(píng)估細(xì)胞存活率（如原代肝細(xì)胞需活力＞85%）

1. 。

2. 標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)：不同實(shí)驗(yàn)室條件差異可能影響結(jié)果，需統(tǒng)一培養(yǎng)基和傳代流程。

技術(shù)改進(jìn)與創(chuàng)新

• 快速消化法（RD法） ：將軟骨細(xì)胞分離時(shí)間從12-16小時(shí)縮短至3小時(shí)，提高存活率和增殖活性。

• 改良培養(yǎng)基：添加維生素C或PLGA納米顆粒，減少血清依賴并維持細(xì)胞功能。

• 3D培養(yǎng)技術(shù)：結(jié)合酶消化法分離細(xì)胞后，模擬體內(nèi)環(huán)境進(jìn)行三維培養(yǎng)，提升研究真實(shí)性。