細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞增殖是生物體生長、發(fā)育、繁殖、遺傳的基礎(chǔ)，是細(xì)胞基本的生理活動(dòng)。生長因子、激素及癌基因產(chǎn)物等均可誘導(dǎo)細(xì)胞的增殖或抑制細(xì)胞的增殖，通過影響細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而實(shí)現(xiàn)。

通過細(xì)胞分裂，可以將復(fù)制的遺傳物質(zhì)，平均地分配到兩個(gè)子細(xì)胞中去。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)包括MTT法和CCK8法。

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

MTT全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide。MTT比色法是常用的檢測細(xì)胞存活和生長的方法之一，其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT 還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶標(biāo)儀在490nm波長處測定其光吸收值，在細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，甲瓚結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比，因此490nm波長處的吸光值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。該方法已廣泛用于抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等。

Cell Counting Kit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓*（1-Methoxy PMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazan dye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。