細胞分選實驗

實驗原理

流式細胞分選是利用流式細胞分選儀，對細胞的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學性狀及功能狀態(tài)等進行定性或定量檢測，它可根據(jù)發(fā)射光的熒光強度和波長將發(fā)光顆粒亞群分開并可實現(xiàn)單克隆分選，對復雜樣本中的細胞進行鑒定、分類、定量和分離。免疫磁珠細胞分選是把細胞用超級順磁性的 MACS MicroBeads （MACS微型磁珠）特異性地標記，磁性標記完后，把這些細胞通過一個放在強而穩(wěn)定磁場中的分選柱。分選柱里的基質(zhì)造成一個高梯度磁場。被磁性標記的細胞滯留在柱里而未被標記的細胞則流出。當分選柱移出磁場后，滯留柱內(nèi)的磁性標記細胞就可以被洗脫出來，這樣就*可以獲得標記和未標記的兩個細胞組份。

 實驗流程

流式細胞分選

(1)取1式細胞⁵個待檢測的細胞，加5 ml DPBS洗滌，室溫2000 r/min離心5 min，棄上清，然后用200 μl 0.5% BSA-DPBS重懸細胞；

(2)想細胞懸液中加入熒光染料標記的抗體，4℃孵育30 min；

(3)將染好的細胞用0.5% BSA-DPBS 洗滌兩次，然后用500 μl 0.5% BSA-DPBS重懸，流式細胞儀檢測；

(4)結(jié)果統(tǒng)計分析。

磁珠細胞分選方法

(1)離心收集待分離細胞，用少量PBE孵育液（0.5%BSA、0.08%EDTA，PH7.2），真空抽濾除菌及液體內(nèi)氣體，充分混懸細胞（0.5 ml/1及液體⁸細胞），加入一抗（10-20 μg/ml終濃度），4℃孵育30 min；

(2)用20倍體積PBE洗細胞一次，再加PBE（0.3 ml/1/ml⁸細胞）充分混懸細胞后，加入相應(yīng)二抗包被的超微磁珠，混勻后置8~15℃孵育10~15 min；

(3) 將分離柱安裝入磁場中，加入0.5 ml PBE，在重力作用下自然流盡,以預處理分離柱。

服務(wù)說明

(1)客戶提供：待檢測細胞，分選細胞種類。

(2)公司提供：基本實驗步驟、圖片、數(shù)據(jù)分析結(jié)果。

(3)實驗周期：2-3w，具體需要根據(jù)細胞生長情況及實驗內(nèi)容而定。