子宮內(nèi)膜異位癥模型構(gòu)建

一、建模方法分類

1. 自體移植模型（主流方法）

基于"經(jīng)血逆流種植學(xué)說(shuō)"，通過(guò)手術(shù)將自體子宮組織移植至腹腔或特定部位誘導(dǎo)異位生長(zhǎng)。

• 經(jīng)典操作步驟：

1. 動(dòng)物選擇：雌性未交配SD或Wistar大鼠（180-270g），動(dòng)情周期規(guī)律。

2. 術(shù)前處理：皮下注射苯甲酸雌二醇（30-150 μg/kg）以促進(jìn)子宮內(nèi)膜增殖。

3. 組織獲取：麻醉后開腹切除1-1.5cm子宮角，縱行剖開并修剪成5×5mm內(nèi)膜片。

4. 移植部位：

• 腹壁肌肉層（血管豐富區(qū)，成功率>80%）

• 卵巢附近或子宮骶韌帶（模擬盆腔EMT）
  5. 固定方式：無(wú)損傷縫線將內(nèi)膜面朝向腹腔縫合，保留肌層以促進(jìn)血管生成。

• 術(shù)后處理：

• 預(yù)防性抗生素（如青霉素）及二次雌激素注射維持激素環(huán)境

• 4-8周后開腹評(píng)估移植物體積（≥8mm3）及病理特征

2. 同種異體移植模型

用于藥物篩選時(shí)避免供體-受體個(gè)體差異干擾：

• 操作要點(diǎn)：

• 供體鼠子宮內(nèi)膜碎片經(jīng)RPMI1640培養(yǎng)基處理后腹腔注射至受體鼠

• 受體鼠需同步激素處理（雌二醇每4天注射，共2次）

• 優(yōu)勢(shì)：標(biāo)準(zhǔn)化移植組織量，適合高通量藥效評(píng)價(jià)

3. 誘導(dǎo)型模型

通過(guò)激素或藥物干預(yù)模擬EMT病理環(huán)境：

• 激素誘導(dǎo)：

• DES（二乙基甲合資藥物）聯(lián)合手術(shù)，促進(jìn)血管生成及炎癥反應(yīng)

• 雌孕激素比例失調(diào)：高劑量雌二醇+低孕酮環(huán)境

• 藥物干預(yù)：

• GnRH拮抗劑（如Cetrorelix）緩釋植入，誘導(dǎo)慢性低雌激素狀態(tài)

• 亮丙瑞林微球抑制垂體-性腺軸，評(píng)估病灶wei縮效果

4. 基因工程模型

新興技術(shù)用于機(jī)制研究：

• 熒光標(biāo)記模型：CFP轉(zhuǎn)基因鼠子宮內(nèi)膜碎片移植，實(shí)現(xiàn)病灶實(shí)時(shí)追蹤

• 基因敲除模型：針對(duì)VEGF、COX-2等靶點(diǎn)構(gòu)建，但成本高且周期長(zhǎng)

二、模型驗(yàn)證指標(biāo)

1. 形態(tài)學(xué)評(píng)估

• 肉眼觀察：移植物呈囊狀隆起，內(nèi)含黏液或血性液體，血管網(wǎng)豐富

• 體積測(cè)量：游標(biāo)卡尺或光聲成像（PAI）動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)病灶大小及氧飽和度

• 組織病理學(xué)：

• H&E染色：腺體擴(kuò)張、乳頭狀增生，腺上皮柱狀化

• Masson染色：評(píng)估纖維化程度

• PAS染色：檢測(cè)糖原沉積（異位內(nèi)膜特征）

2. 生化與分子指標(biāo)

• 激素水平：

• 血清雌二醇（E2）升高，孕酮（P4）降低，E2/P4比值失調(diào)

• 垂體GnRHR mRNA表達(dá)下調(diào)提示中樞調(diào)控異常

• 炎癥與血管生成：

• IL-6、TNF-α、COX-2等促炎因子升高

• VEGF、FGF等血管生成標(biāo)志物過(guò)表達(dá)

• 增殖與凋亡：

• PCNA、Ki67陽(yáng)性率增加（>30%）

• Bcl-2/Bax比值失衡，Caspase-3活性降低

3. 功能學(xué)評(píng)估

• 生育影響：模型鼠妊娠丟失率升高，胚胎著床數(shù)減少
  

• 疼痛行為：機(jī)械性痛閾降低（需結(jié)合Von Frey纖維測(cè)試）

三、模型比較與適用場(chǎng)景

四、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

1. 動(dòng)物選擇：

• 優(yōu)先選用SD大鼠（性周期穩(wěn)定，耐受性強(qiáng)）

• 術(shù)前確認(rèn)動(dòng)情周期（陰道涂片法），選擇動(dòng)情前期手術(shù)

2. 技術(shù)細(xì)節(jié)：

• 移植組織需保留基底膜以維持腺體結(jié)構(gòu)

• 縫合時(shí)避免壓迫血管，確保血供

3. 倫理與質(zhì)量控制：

• 嚴(yán)格無(wú)菌操作，術(shù)后鎮(zhèn)痛（如布洛芬混懸液）

• 設(shè)立假手術(shù)對(duì)照組（注射脂肪組織替代內(nèi)膜）

4. 創(chuàng)新方向：

• 結(jié)合MRI或PAI實(shí)現(xiàn)無(wú)創(chuàng)監(jiān)測(cè)

• 開發(fā)類器官共培養(yǎng)模型模擬異位微環(huán)境

五、典型應(yīng)用案例

1. 藥物評(píng)價(jià)：

• GnRH激動(dòng)劑GenSci006顯著縮小病灶體積（抑制率>60%），降低E2水平

• 中藥復(fù)方（如加味沒竭片）通過(guò)調(diào)控ERα/ERβ平衡抑制異位內(nèi)膜增殖

2. 機(jī)制研究：

• 熒光模型揭示VEGF介導(dǎo)的血管新生是病灶存活關(guān)鍵

• 基因表達(dá)譜分析發(fā)現(xiàn)EMT相關(guān)通路（Wnt/β-catenin）異常激活