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裸鼠皮下成瘤模型構建：裸鼠皮下成瘤模型是腫瘤研究中應用廣泛的動物模型之一，主要用于腫瘤生長機制研究、藥物療效評價、基因功能驗證等方向。該模型通過將人源或鼠源腫瘤細胞/組織移植至免疫缺陷裸鼠皮下，模擬腫瘤生長微環境。
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品系選擇：
常用品系：BALB/c nu/nu裸鼠（T細胞缺陷）、NOD-SCID（T/B/NK細胞缺陷）、NSG（NOD-SCID-IL2Rγ-/-，全免疫缺陷）。
性別與周齡：優先選擇雄性裸鼠（6-8周齡，體重18-20 g），減少激素干擾。
飼養條件：SPF級環境，溫度22-25℃，濕度40-70%，12小時光照/黑暗周期。
細胞株選擇：
高成瘤細胞：HCT-116（結直腸癌，成瘤率100%）、SKOV3（卵巢癌）、SGC-7901（胃癌）。
爭議性細胞：如Hep-G2（肝癌）需高細胞密度（1×10? cells/只）接種。
細胞預處理：
傳代要求：取對數生長期細胞（活力>95%），胰酶消化后離心（1000 rpm，5分鐘），重懸于PBS或基質膠（Matrigel）中（體積比1:1）。
濃度調整：常規接種濃度1×10?~1×10? cells/mL（具體依細胞株特性調整）。
注射部位：
腋下：右腋皮下（淋巴引流明確，便于觀察轉移）。
背部：中線兩側（避免動物抓撓）。
操作步驟：
麻醉：1%戊ba比妥鈉（50 mg/kg）或異氟烷吸入麻醉。
注射：使用1 mL注射器（22-25G針頭），緩慢注入0.1-0.2 mL細胞懸液（避免滲漏）。
退針后輕壓注射點，防止細胞液反流。
成瘤時間：
快速成瘤型：HCT-116（7天可見結節）。
慢速成瘤型：原代細胞或低侵襲性細胞需2-4周。
監測指標：
腫瘤體積：游標卡尺測量長徑（L）和短徑（W），按公式V=1/2×L×W2計算。
動物狀態：體重變化、活動度、腫瘤潰瘍情況。
成功標準：瘤體體積≥100 mm3（通常接種后2-4周）。
生長曲線分析：繪制腫瘤體積-時間曲線，計算倍增時間（如HCT-116約3天）。
HE染色：觀察腫瘤細胞異型性、核分裂象及間質浸潤。
免疫組化：檢測Ki-67（增殖指數）、CD31（微血管密度）等標志物。
基因表達：qPCR或Western blot驗證目標基因（如PRDX4、ASAP1）在瘤體中的表達。
信號通路分析：檢測PI3K/AKT、VEGF等通路關鍵蛋白。
小動物PET/CT：18F-FDG示蹤腫瘤代謝活性。
活體熒光成像：適用于標記熒光素酶（Luc）的腫瘤細胞。
細胞預處理：
基質膠混合：增強細胞黏附與血管生成（如SKOV3聯合Matrigel）。
低溫操作：細胞懸液全程冰上保存，減少凋亡。
動物選擇優化：
年輕裸鼠：4-6周齡代謝活躍，成瘤更快。
免疫強化品系：NSG小鼠適用于低成瘤性細胞。
| 問題類型 | 可能原因 | 解決方案 |
|---|---|---|
| 無腫瘤形成 | 細胞活力低/接種量不足 | 提高細胞濃度至1×10? cells/mL，檢測臺盼藍染色 |
| 腫瘤體積差異大 | 注射不均勻或滲漏 | 使用細針頭（25G），退針后按壓30秒 |
| 動物死亡 | 麻醉過量或感染 | 控制戊ba比妥鈉劑量≤50 mg/kg，術后給予抗生素 |
原位移植模型：
皮下傳代后切取瘤塊（1 mm3）移植至靶器官（如胃壁），模擬轉移。
基因編輯模型：
CRISPR/Cas9敲除目標基因（如KMT2D）后接種，研究基因功能。
案例：卡培他濱抑制HCT-116裸鼠瘤體生長，腫瘤體積減少60%。
評價指標：瘤重抑制率=（對照組瘤重-實驗組瘤重）/對照組瘤重×100%。
案例：sh-PRDX4組瘤體體積較對照組下降50%，證實PRDX4促癌作用。
驗證方法：shRNA慢病毒轉染+皮下成瘤。
案例：過表達miR-449a抑制Bel-7402肝癌細胞轉移，肺轉移灶減少80%。
技術延伸：結合淋巴結解剖與HE染色分析轉移率。
3R原則：
替代（Replacement） ：優先使用體外模型預實驗。
減少（Reduction） ：每組≥5只裸鼠（統計學意義）。
優化（Refinement） ：術中麻醉+術后鎮痛（布洛芬5 mg/kg）。
數據記錄：詳細記錄接種時間、細胞批次、動物編號。
病理存檔：瘤體福爾馬林固定或液氮凍存，供后續分析。
裸鼠皮下成瘤模型因其操作簡便、成本可控和高重復性，成為腫瘤研究的核心工具。未來發展趨勢包括：
多組學整合：單細胞測序解析瘤內異質性。
動態監測技術：納米探針聯合micro-CT實現微轉移灶無創檢測。
人源化升級：PDX（人源腫瘤異種移植）模型替代傳統CDX模型，提高臨床預測性。
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